Introducción: Existe una necesidad creciente de biomarcadores urinarios no invasivos que complementen o reduzcan la dependencia de la cistoscopia y la citología en el diagnóstico, seguimiento y toma de decisiones terapéuticas en el cáncer de vejiga. Los microARNs urinarios y determinadas citocinas han mostrado potencial clínico, aunque su aplicación requiere alta precisión diagnóstica y una reproducibilidad robusta entre plataformas y laboratorios.

Objetivo: Validar el rendimiento diagnóstico y predictivo de los ensayos BlaDimiR y BlaDimiRplus y evaluar su reproducibilidad en condiciones reales de laboratorio y práctica clínica.

Material y métodos: Se analizaron cuatro cohortes independientes, incluyendo dos cohortes de tejido y dos de orina, utilizadas para las fases de descubrimiento, validación y evaluación clínica. El perfilado de microARNs se realizó mediante microarrays y NanoString, con validación posterior mediante RT-qPCR. Las citocinas urinarias se cuantificaron mediante LEGENDplex y ELISA. La reproducibilidad técnica se evaluó entre distintos lotes de reactivos, métodos de extracción de ARN manuales y automatizados, plataformas de qPCR QS5 y QS6, y laboratorios independientes. Asimismo, se analizó la estabilidad del ARN tras múltiples ciclos de congelación y descongelación. Actualmente se encuentra en marcha un estudio prospectivo multicéntrico español con más de quinientas muestras urinarias para validación clínica.

Resultados: La razón urinaria miR-145/miR-182 mostró una elevada precisión diagnóstica para la detección y el seguimiento del cáncer de vejiga, con un área bajo la curva de 0,96, sensibilidad del 93% y especificidad del 86%, independientemente de la hematuria o del grado tumoral. Una firma de siete microARNs permitió discriminar respondedores y no respondedores a BCG, con valores de AUC entre 0,82 y 0,91. La citocina CXCL10 predijo de forma independiente la respuesta a BCG con un AUC de 0,74. La combinación de seis microARNs con CXCL10 y TGF-β1, denominada BlaDimiRplus, alcanzó una discriminación excelente con AUC de 1,0. La reproducibilidad interplataforma e interlaboratorio fue alta, observándose variabilidad mínima. Únicamente los ciclos repetidos de congelación y descongelación afectaron significativamente a la cuantificación del ARN.

Conclusiones: BlaDimiR y BlaDimiRplus son ensayos urinarios robustos y reproducibles que permiten la detección, el seguimiento y la predicción de respuesta a inmunoterapia en el cáncer de vejiga.